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嘔吐毒素檢測試劑盒
2014-12-08  點擊數:
商品名稱:嘔吐毒素檢測試劑盒
商品編號:
市場價:¥0.00
優惠價:¥0.00
計量單位:96孔/盒
  • 產品描述
  • 應用意義
  • 常用問題
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嘔吐毒素酶聯免疫檢測試劑盒用于檢測飼料中的嘔吐毒素含量、谷物中的嘔吐毒素含量。

以下為飼料、谷物中的嘔吐毒素檢測試劑盒的使用說明,欲了解更多產品可聯系我公司021-50947188 

1    概述

嘔吐毒素屬于霉菌的單端孢菌素族,是由幾種粉色鐮刀霉真
菌屬產生的。玉米中最容易產生這種毒素,在小麥、玉米以及稻 米中的含量通常是 mg/kg 級的,由于他們高的細胞毒素及免疫抑制性質,對人類及動物構成了健康威脅。
 本試劑盒采用競爭一步 ELISA 方法,能快速、準確地檢測谷物、飼料中的嘔吐毒素。
2    原理
本試劑盒采用競爭一步 ELISA 方法。樣品中的游離嘔吐毒素與酶標記的嘔吐毒素競爭結合酶標板微孔中固相化的嘔吐毒素特異性抗體,通過洗滌洗掉未結合的酶標記嘔吐毒素,再通過酶的專一性顯色劑顯色根據顯色的深淺來判斷樣品中嘔吐毒素。根據競爭性原理,如果樣品中的游離嘔吐毒素量少,則酶標記的嘔吐毒素結合的多,顯色深;反之,則顯色淺。檢測時設置標準線,通過標準曲線測定樣品中嘔吐毒素的含量。
3    試劑盒組成
3.1嘔吐毒素酶標板:96孔
3.2 嘔吐毒素標準品:6瓶(1ml/瓶),分別是:
標準品
濃度ng/ml
0
1
3
9
27
81
3.3 嘔吐毒素酶結合物:1瓶(6ml)
3.4 濃縮洗滌液:1瓶(10×,50ml)
3.5 底物液A:1瓶(6ml)
3.6 底物液B:1瓶(6ml)
3.7 終止液:1瓶(6ml)
3.8 說明書:1份
3.9 質檢報告:1份
4    需要而未提供的材料
4.1 酶標儀(檢測波長450nm,參考波長630nm)
4.2 微量移液器
4.3 前處理所需試劑及相關儀器
5    貯存
5.1 試劑盒貯存于2-8℃,切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
5.3 該產品有效期為12個月
6    注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(20-25℃)。
6.3 不要使用過期試劑盒;不同批號試劑盒中的試劑不得混
用;不同標準品、樣品所用吸頭不能混用。
6.4 避免所有試劑接觸皮膚;混合試劑時應避免起泡。
6.5使用過的玻璃容器及嘔吐毒素溶液接觸過的容器最好用 pH7 的高氯酸溶液(10%V/V)浸泡過夜。
7    試劑配制
7.1 洗滌工作液:
用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積進行稀釋
例如:10ml洗滌工作液=1ml濃縮洗滌液+9ml去離子水
8    樣品處理程序
8.1 取 2g 有代表性的研磨粉末狀樣品,置于干凈離心管或廣口 瓶中,加入 10ml 去離子水,儀器振蕩或手動混勻 5 分鐘;
8.2 離心機 5000r/min離心 10 min,取上清液用去離子水按 1:3 稀釋; 例如:取 200μl 上清液加 600μl 去離子水,待檢。
8.3 用 HCl 或 NaOH 將 8.2 中待檢上清稀釋液調 PH 至中性(若樣本還是渾濁,建議用8000r/min離心5min),按 50μl/孔進行加樣分析檢測。
注意:樣品稀釋系數為 20;如果檢測值超出檢測范圍,請用去離子水將 8.3 中待檢上清稀釋液進一步稀釋到合適的濃度,并調整樣品稀釋系數。
9    酶免分析步驟
9.1實驗準備
9.1.1預先進行編號,標記標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測(每次實驗都須做標準曲線);
9.1.2使用前將所有試劑回升至室溫,取所需數量的微孔條,將多余板條用試劑盒提供的自封袋重新密封同時排除里面空氣,并立即放回2-8℃干燥保存。
9.2分析步驟
9.2.1在標準品孔中加入50µl各標準品溶液,在各樣品孔中加入50µl樣品溶液;
9.2.2在所有孔中加入50µl的嘔吐毒素酶標記物溶液,輕微晃動反應板使之徹底混勻,室溫下(20-25℃)溫浴40min;
9.2.3甩干孔中液體,用洗滌工作液(250ul/孔)洗滌微孔板4-5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體;
9.2.4洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl底物液A,再加 50µl底物液B,輕微晃動使之混勻;
9.2.5室溫下(20-25℃)溫浴15min(若顏色較淺可適當延長至20min),每孔中加入50µl終止液,混勻,在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。
10 結果計算
推薦使用快靈Log/Logit計算程序對檢測結果進行計算,將檢測OD均值和標準品濃度輸入,即可自動獲得檢測結果,再乘以稀釋倍數,即為樣品種嘔吐毒素濃度。
11 試劑盒其他參數
本試劑盒檢測下限為 20ppb
B0 吸光度值應大于 0.8,小于 0.8 認為試劑已變質不可用
試劑盒吸光度板內誤差小于 8%,板間誤差小于 15%
用本說明書提供的樣本提取方法回收率為 95%±15%
12 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品,建議用其他方法如HPLC加以確認。

 

常見問題及解答
問題一、加入反應終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低

可能原因
解決辦法
未加入酶結合物
按照操作步驟重復實驗
試劑盒未能充分回溫
將試劑盒放在室溫下(20-25℃) 回溫后再進行操作(最少一個小時)
試劑盒已過有效期
請使用在有效期內
實驗室室溫太低(低于20 ℃ )
請提高反應溫度至(20-25℃) ,若無法提高,請適當延長第一步溫育反應時間 ,可將30min延長至40min)
未使用試劑盒中酶結合物、洗滌液等
請使用試劑盒中提供的物品進行實驗,不同批號的試劑盒不能混用
終止試驗后太久未判讀
請在加入終止液后5min內判讀
使用過的試劑盒未保存好
實驗后未用完的試劑要放回2-8 ℃保存,未用完的酶標板要放到試劑盒提供的自封袋中與干燥劑一起密封保存在2-8 ℃
洗液配制錯誤
請使用試劑盒提供的洗液

 
問題二、標準曲線線性不佳,與試劑盒中質檢報告的曲線不一致,或者重復性差

可能原因
解決方法
溫育位置未避光或收到氣流干擾
溫育時不要直接暴露在強光下(日光等沒有關系),也不要受到氣流的干擾(如可在不通風的實驗室)
操作時間拖太久
實驗操作熟練后再進行實驗,一旦開始實驗就不要在中途離開
板孔間相互污染
加樣時,要小心切勿濺出孔外,造成其他板孔的污染
加樣量不準
移液器請校準,保持加樣的準確性
加樣時的操作放大不正確
 
洗滌過程不正確
洗滌時確保每個微孔加樣量一致;每次洗滌時間不要太長(導致過度洗板),也不要太短(洗板不徹底),一般10s左右;洗滌步驟完成后立即進行下一步驟

 
問題三、背景值或吸光度(OD)過高

可能原因
解決方法
室溫太高(大于25 ℃ )
保持實驗室溫度20-25℃,避免在熱源或陽光直射處實驗
底物溶液受到污染
若發現底物溶液已經變色,不要再使用
反應時間太長
請嚴格控制實驗反應時間
酶結合物污染了試劑盒中其他試劑
使用過的吸頭立即丟棄,每次吸取不同的試劑要更換新的吸頭,凡是試劑(特別是酶結合物和底物)接觸過的容器立即清洗干凈
使用了質量差的水
嘗試用蒸餾水配制溶液

 
問題四、一個或多個標準品數據點超出曲線范圍

可能原因
解決方法
洗滌過程不正確
洗滌時確保每個微孔加樣量一致;每次洗滌時間不要太長(導致過度洗板),也不要太短(洗板不徹底),一般10s左右;洗滌步驟完成后立即進行下一步驟
微孔中的試劑未充分混勻
試劑加完后,在振蕩器上振蕩混勻(沒有振蕩器可輕敲板四周或在桌面上做圓周運動使其充分混勻)
陰性標準品受到污染
嚴格按照試劑盒的操作說明進行實驗
加入標準品和試劑的時間不一致
確保一切就緒,由低濃度到高濃度快速添加標準品并保證不被打擾
標準品添加順序混亂或放置錯誤位置
按照說明要求重復試驗并保證由低到高的順序依次添加
標準品被污染或與其他標準品混淆
改用新標準品
標準品加樣量不準
確保加樣的準確性

  
問題五、板內及板間差異大

可能原因
解決方法
加入標準品和試劑、樣品的時間不一致
盡可能排槍,中間不要間斷
排槍使用不當
校準排槍檢測吸嘴是否套緊,確保吸液量一致
洗滌系統出現故障
檢測洗滌系統
不同批次的試劑混用
確保每個試劑盒不混用
板與板之間孵育時間差距過大
獨立計時,確保一致的孵育時間

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